Определение времени свертывания плазмы крови. Норма для времени свертывания крови – значение анализа

Однако в связи с тем, что в суспензии каолина отсутствуют фосфолипиды, его воспроизводимость существенно ниже АПТВ-теста. Каолиновый тест нецелесообразно применять для обнаружения каких-либо коагулопатий, однако тест пригоден для выявления ВА.

Принцип метода

Определяют скорость образования сгустка фибрина после рекальцификации смеси, содержащей цитратную БТП и каолин. Последний активирует коагуляционный фактор XII, поэтому его результаты отклоняются от нормы при недостаточности многих коагуляционных факторов (I, II, V, VIII, IX, X, XI, XII), наличии ингибиторов свертывания, а также у пациентов, применяющих антикоагулянты.

Реактивы и оборудование

• Суспензия каолина в буфере (рН 7,4).
• Раствор кальция хлорида (0,025 М).
• Коагулометр (при отсутствии коагулометра - водяная баня и секундомер).

Образцы крови для исследования Для выполнения теста используют БТП. Поскольку тест фосфолипид-зависимый, весьма важны правильные режим и время проведения центрифугирования. Для эффективного удаления тромбоцитов целесообразно использовать двойное центрифугирование образцов (подробнее см. приложение 3).

Техника выполнения

В кювете коагулометра (или пробирке при мануальной технике выполнения) смешивают 0,1 мл исследуемой БТП и 0,1 мл взвеси каолина. Затем инкубируют эту смесь при температуре +37 °С в течение 3 мин. После инкубации в кювету (или пробирку при мануальной технике выполнения) добавляют 0,1 мл раствора кальция хлорида, имеющего температуру +37 °С, в тот же момент включают таймер коагулометра (или секундомер при мануальной технике выполнения) и регистрируют время коагуляции.

Оценка результатов исследования

Каолиновое время свертывания оценивают в секундах. Необходимо определить время свертывания не только исследуемой БТП, но и контрольной нормальной плазмы. Нормативы существенно зависят от техники определения и варианта коагулометра, поэтому каждой лаборатории следует уточнить локальный диапазон нормальных значений.

Сравнивают результаты каолинового теста в исследуемой плазме с аналогичным показателем у здорового донора. Отклонением от нормы следует считать удлинение времени свертывания на 25 % от значения, полученного при исследовании контрольной БТП.

Интерпретация результатов исследования Пролонгированные показания в каолиновом тесте наблюдаются при снижении любого коагуляционного фактора, кроме факторов VII и XIII. Кроме того, этот тест отклоняется от нормы при наличии в крови различных ингибиторов коагуляции, в т. ч. ВА. Значительное удлинение в каолиновом тесте, а зачастую и несвертываемость обуславливает гепарин.

Укорочение времени коагуляции в каолиновом тесте часто обусловлено дефектами преаналитического этапа исследования.

Причины ошибок

• Ошибки преаналитического этапа исследования, в т. ч. неправильная дозировка цитрата при заборе венозной крови.
• Дефекты центрифугирования при получении образцов БТП.
• Попадание в исследуемую кровь гепарина из венозного катетера.
• Гемолиз.

Другие аналитические технологии Существует вариант метода, оценивающий время коагуляции в богатой тромбоцитами плазме. Однако целесообразность его применения в повседневной диагностической практике вызывает сомнения.

К основным тестом свертывания крови относят определение времени ее свертывания (по Ли-Уайту), время рекальцификации плазмы, показатель АЧТВ, время ретракции кровяного сгустка и некоторые другие параметры.

Время свертывания крови

Время свертывания крови по Ли-Уайту определяют как время которое проходит от момента забора крови из сосуда до образования кровяного сгустка.

Этот показатель является неспецифичным и характеризует свертывающую систему крови в целом.

Для проведения анализа один миллилитр крови набирается в пробирку (обычную или силиконовую) и выдерживается при температуре 37 градусов. В норме, в несиликоновой пробирке, кровь сворачивается за 5-7 минут, а в силиконовой – за 15-25.

Удлинение времени свертывания крови возможно в таких случаях:

• Анемия вследствие кровопотери.
• Патология тромбоцитов.
• Недостаток факторов свертывания в крови.
• Избыток разжижающих кровь веществ (антикоагулянтов).

Если кровь не сворачивается вообще, это, чаще всего, является признаком резкого дефицита фибриногена.

Уменьшение времени свертываемости крови встречается довольно редко.

Иногда определяют также индекс контактной активации. Этот показатель характеризует соотношения времени свертывания в силиконовой и несиликоновой пробирках и в норме колеблется от 1,7 до 3,0.

Увеличение индекса контактной активации возможно при нарушении функций печени, избыточном количестве антикоагулянтов, нарушении определенных звеньев гемостаза.

Время рекальцификации плазмы

Под временем рекальцификации плазмы подразумевается промежуток времени, который необходим для образования сгустка после добавления солей кальция. Нормальным показателем считается диапазон в одну-две минуты.

Исследуется также активированное время рекальцификации (каолиновое время или показатель АВР). От предыдущего этот параметр отличается методикой проведения анализа. Норма АВР – 50-70сек.

Удлинение времени рекальцификации возможно при:

• Недостатке тех или иных факторов свертывания крови
• Патологии тромбоцитов
• Избыточным содержанием антикоагулянтов

Уменьшение времени рекальцификации – признак повышенной активности свертывающей системы.

Активированное частичное тромбопластиновое время

Этот показатель также носит названия АЧТВ, АПТВ или каолин-кефалинового времени. Данный тест используется для определения функции плазменных факторов свертывания крови.

В норме АЧТВ составляет 35-45 секунд.

Увеличение АЧТВ более 45 секунд может наблюдаться при:

• Идиопатической тромбоцитопенической пурпуре
• Гемофилии
• Избытке антикоагулянтов
• Синдроме ДВС
• Некоторых болезнях печени

Уменьшение АЧТВ (менее 35 секунд) может быть признаком неправильной техники забора крови для анализа либо повышенной свертываемости крови.

Ретракция кровяного сгустка

Этот показатель используется для количественной оценки плотности образованного при свертывании крови сгустка.

Суть метода состоит в том, что крови дают свернуться, а затем оценивают соотношение между жидкой частью после образования тромба и исходным объемом взятой для анализа крови.

При определении стандартным методом ретракция кровяного сгустка находится в пределах 45-65%.

Уменьшение показателя ретракции возможно в случае:

• сниженного количества тромбоцитов
• повышенного количества эритроцитов
• некоторых наследственных заболеваниях

Повышенная ретракция сгустка встречается при анемиях и увеличении количества фибриногена в крови.

Коагулография и тромбоэластография

В некоторых лабораториях активность свертывающей системы крови определяется не по стандартным тестам коагулограммы, а с помощью специальных приборов (коагулографа или тромбоэластографа) которые позволяют получить графическое изображение процессов свертывания крови.

Анализ такого изображения (при соблюдении должной техники записи) позволяет наиболее точно оценить гемостаз.

При помощи тромбоэластографии определяют длительность трех основных фаз свертывания крови и некоторые специфические показатели.

Коагулография – высокоспецифичный метод при помощи которого можно определить продолжительность отдельных процессов свертывания.

Аутокоагулограмма

Аутокоагулограммой или аутокоагуляционным тестом называется относительно редко используемая методика исследования свертывающей системы.

Для проведения анализа в особым образом обработанную кровь с равными промежутками в течение часа добавляют специфический реагент, каждый раз определяя свертываемость крови. По полученным данным вычерчивается график. Этот график отображает взаимосвязь и равновесие между свертывающей и противосвертывающей системы крови.

При использовании сокращенной методики тестирование проводится в течение десяти минут.

Чаще всего метод построения и анализа аутокоагулограммы применяют при длительном использовании гепарина или для диагностики гемофилии.

Коагуляционные пробы (лат. coagulatio свертывание, сгущение; синоним: осадочные пробы, флоккуляционные пробы, пробы на лабильность сывороточных белков, диспротеинемические тесты) - полуколичественные и качественные пробы, предназначенные для определения коллоидной устойчивости белков сыворотки крови при различных патологических состояниях, сопровождающихся диспротеинемией.

Основным органом, в котором синтезируются белки сыворотки крови, является печень, поэтому нарушение функции клеток печеночной паренхимы всегда сказывается на структуре синтезируемых в них белков, В тех случаях, когда еще нельзя отметить изменений в величине альбумин-глобулинового коэффициента , т.е. на самых ранних стадиях развития патологических состояний, затрагивающих печень, с помощью К. п. выявляются нарушения коллоидной устойчивости сывороточных белков. Именно поэтому К. п. ранее называли печеночными пробами. Позже было установлено, что К. п. изменяются при различных заболеваниях, сопровождающихся диспротеинемией.

Устойчивость белкового коллоидного раствора к коагуляции (слипанию частиц с образованием их агрегатов) зависит от величины отдельных коллоидных частиц, их электрического заряда и толщины сольватного слоя, окружающего каждую частицу. Образование агрегатов и даже выпадение их в осадок происходит при увеличении размера коллоидных частиц, уменьшении их электрического заряда или разрыве сольватного слоя между частицами. При диспротеинемиях физико-химические характеристики коллоидного раствора, образуемого белками сыворотки крови, меняются и те факторы, которые раньше не могли вызвать его коагуляцию, приводят к слипанию частиц коллоидного раствора сывороточных белков с образованием более или менее крупных агрегатов. Диагностическая ценность К. п. возрастает при сопоставлении их результатов с результатами других проб и клинической картины заболевания.

В СССР в качестве унифицированных методов используются тимоловая, сулемовая пробы и проба Вельтманна.

Тимоловая проба (проба тимолового помутнения, тимоловая мутность) предложена в 1944 г. английским патологом Маск-Лаганом (N.F. Mac-Lagan). Она основана на определении степени помутнения сыворотки крови при ее взаимодействии с насыщенным раствором тимола в веронал-мединаловом буфере, рН 7,8. Интенсивность помутнения зависит от природы буферного раствора, величины рН, концентрации, степени чистоты используемого тимола и от температуры.

Проведение тимоловой пробы заключается в следующем: к 6 мл тимолово-вероналового буферного раствора прибавляют 0,1 мл негемолизированной сыворотки крови и после 30 мин стояния фотометрируют при длине волны 630- 660 нм против тимолово-вероналового буфера в кювете с толщиной слоя 1 см . Реакцию проводят при t° 25°. Степень помутнения оценивается по калибровочной кривой, которую строят по результатам определения оптической плотности разведений стандартной суспензии сульфата бария.

Полагают, что тимоловая проба положительна при относительном уменьшении содержания альбуминов в сыворотке крови и увеличении содержания b - и g -глобулинов и связанных с b -глобулинами липидов (липопротеинов).

При заболеваниях, не сопровождающихся повреждением паренхимы печени, положительная тимоловая проба встречается редко. Особенно большое значение эта проба приобретает при вирусном е, т.к. она становится положительной до развития желтухи. Тимоловая проба положительна также при безжелтушных ах, после перенесенного а, при е печени.

Сулемовая проба (сулемово-осадочная проба) относится к группе реакций Таката. Реакция Таката, или реакция Таката - Ара (фуксин-сулемовая проба), предложена в 1925 г. японскими патологами Таката (М. Takata) и Ара (К. Ага) и основана на определении степени помутнения, развивающегося при взаимодействии раствора сулемы (двуххлористой ртути HgCL 2) и карбоната натрия с сывороткой крови.

Проведение сулемовой пробы состоит в следующем: 0,5 мл негемолизированной свежей сыворотки разводят 1 мл физиологического раствора и титруют 0,1% раствором сулемы пока не разовьется стойкое помутнение такой степени, что через вертикальный слой помутневшей жидкости нельзя прочесть газетный текст. Результаты сулемовой пробы выражают в миллилитрах раствора сулемы, пошедшего на титрование.

В норме на титрование идет 1,6-2,2 мл раствора сулемы. Меньшие количества указывают на относительное повышение содержания глобулинов и уменьшение величины альбумин-глобулинового коэффициента.

Сулемовая проба положительна (количество раствора сулемы, пошедшее на титрование, выше нормы) при е печени, острых токсических ее поражениях, е, силикотуберкулезе.

Проба Вельтманна (коагуляционная проба, австрийского врача Вельтманна, реакция Вельтманна, коагуляционная лента Вельтманна) предложена в 1930 г. Вельтманном (О. Weltmann) и основана на появлении помутнения при добавлении к сыворотке крови раствора хлористого кальция. В 12 последовательно пронумерованных пробирок («лента») добавляют по 0,1 мл сыворотки крови и по 5 мл раствора хлорида кальция соответствующих разведений (в процентах): 0,1; 0,09; 0,08; 0,07; 0,06; 0,05; 0,045; 0,04; 0,35; 0,03; 0,02 и 0,01. Содержимое пробирок перемешивают и штатив с ними погружают в кипящую водяную баню на 15 мин. Вынув штатив, отмечают результат. Жидкость в пробирках может быть прозрачна, мутна или же содержать хлопьевидный осадок, причем разница между мутью и выпадением хлопьев очень отчетлива. Отмечают пробирки, в которых выпали хлопья. В норме хлопья выпадают в 6-7-й пробирке (т.е. длина «ленты» по Вельтманну 6-7 пробирок). Укорочение ленты Вельтманн называл сдвигом влево, удлинение сдвигом вправо. При резком сдвиге влево может не быть свертывания ни в одной пробирке.

Позже был предложен ряд модификаций пробы Вельтманна, которые в основном сводились к изменению количества испытуемой сыворотки крови, хлористого кальция и времени кипячения. В СССР в качестве унифицированного метода принята модификация пробы Вельтманна,

предложенная Тейфлем (A. Teufl).

Проба Вельтманна в модификации Тейфля состоит в следующем: к 0,1 мл негемолизированной свежей сыворотки крови прибавляют 4,9 мл воды, перемешивают и добавляют 0,1 мл (2 капли) 0,5% раствора хлорида кальция. Пробирку встряхивают и нагревают над пламенем до однократного вскипания смеси. Остужают и в проходящем свете определяют, нет ли помутнения. Если помутнения нет, в эту же пробирку добавляют еще 0,1 мл того раствора и вновь кипятят и т.д. Результаты оценивают по общему количеству 0,5% раствора хлорида кальция, добавленного к пробе до появления хлопьевидного осадка.

Лабораторная диагностика нарушений системы гемостаза является одной из самых дорогостоящих в лабораторной практике. Выполнение всех возможных тестов для уточнения характера нарушений для всех пациентов – практически нереальная задача. Поэтому чрезвычайно важно соблюдать этапность проведения тестов, исходить из клинических данных и анамнеза пациента. На первом этапе для уточнения направленности нарушений необходимо провести тесты, отражающие состояние целых звеньев системы гемостаза. Существует набор рекомендуемых скрининговых тестов для диагностики состояния системы гемостаза:

• АЧТВ (активированное частичное тромбопластиновое время)
• Протромбиновое время (по Квику)
• Тромбиновое время
• Фибриноген

Время свертывания крови (ВСК)
ВСК является ориентировочным показателем состояния многоступечатого коагуляционного каскада, в результате которого растворимый фибриноген переходит в нерастворимый фибрин. Данный показатель оценивает процесс свертывания в целом и не дает возможности выявить механизмы, ведущие к его нарушению. Укорочение ВСК свидетельствует о необходимости профилактики гиперкоагуляции, которая нередко угрожает тромбозом или тромбоэмболией.

Используется как скрининговый тест для оценки внутреннего каскада свертывания плазмы, диагностики волчаночного антикоагулянта и мониторинга антикоагулянтного действия гепаринов. АЧТВ – более значимый тест для первичного выявления патологии, чем протромбиновое время, так как выявляет относительно часто встречающуюся гемофилию А и В (дефицит факторов VIII и IX соответственно) и наличие волчаночного антикоагулянта.
Тест АЧТВ-L + обладает особо высокой чувствительностью к волчаночному антикоагулянту. При наличии ВА в крови время свёртывания удлиняется в 3-3,5 раза.
Тест АЧТВ-L — отличаетсявысокой специфичностью к внутренним факторам свертывания и гепарину и низкой чувствительностью к волчаночному антикоагулянту, что позволяет дифференцировать нарушения во внутреннем каскаде свертывания еще на этапе их скрининга.

– широко используемый скрининговый тест для оценки состояния внешнего и общего путей когуляционного каскада свертывания плазмы. Нормальные величины ПВ для взрослых составляют 11-15 сек, для новорожденных – 13-18 сек. Увеличение ПВ говорит о наклонности к гипокоагуляции и может зависеть от отдельных причин:

• Недостаточность одного или нескольких факторов протромбинового комплекса, которая наблюдается при таких редких наследственных коагулопатиях, как гипопроконвертинемия (дефицит фактора VII) и гипопротромбинемия (дефицит фактора II);
• Дефицит фактора X при амилоидозе (который поглощается амилоидом) и дефицит факторов V и VII при нефротическом синдроме (которые выделяются с мочой);
• Снижение синтеза факторов протромбинового комплекса при заболеваниях печени;
• Энтеропатия и кишечные дисбактериозы, ведущие к недостаточности витамина К;
• При лечении антагонистами витамина К;
• При ДВС-синдроме (потребление факторов протромбинового комплекса);
• При хроническом панкреатите, раке поджелудочной железы и ж/пузыря;
• Снижении уровня фибриногена в крови (до 1 г/л и ниже);
• При острых и хронических лейкозах (вследствие развития ДВС-синдрома);
• При повышении уровня антитромбина или антитромбопластина;
• Лекарственные средства (анаболические стероиды, антибиотики, аспирин в больших дозах, слабительные, метотрексат, никотиновая кислота, хинидин, хинин, тиазидные диуретики, толбутамид).

Укорочение ПВ говорит онаклонности к гиперкоагуляции и может быть отмечено в начальных стадиях тромбоза глубоких вен нижних конечностей, при полицитемии, в последние месяцы беременности.

Контроль антикоагулянтной терапии
Определению ПВ отводится ведущая роль в контроле за терапией непрямыми антикоагулянтами. Результаты исследования традиционно выражаются в секундах. При определении ПВ используется активатор свертывания крови – тромбопластин. Если в лаборатории (лабораториях) сегодня испльзуется один тромбопластин, а завтра другой, то ПВ у пациента будет отличаться день ото дня. Для того, чтобы исключить влияние тромбопластина на результаты определения ПВ, применяют показатель – международное нормализованное отношение МНО, которое обеспечивает возможность сравнения результатов, полученных в разных лабораториях, и гарантирует более точный конторль за лечением непрямыми антикоагулянтами. МНО рассчитывают по формуле:

МНО пациента = [ ПВ пациента (сек)/ПВ контроля (сек)] международный индекс чувствительности

Основная задача мониторинга непрямыми антикоагулянтами – предупреждение кровотечения. Доза антикоагулянта должна быть подобрана таким образом, чтобы поддерживать МНО на необходимом уровне, зависящим от причины назначения лечения. У большинства больных МНО необходимо поддерживать на уровне 2-3,0. Контроль МНО необходимо проводить каждые 2-3 недели.

Для контроля уровня антикоагулянтов ВОЗ разработаны следующие рекомендации

Клиническое состояние
Профилактика первичного и повторного тромбоза глубоких вен и легочной тромбоэмболии	2,5 (2,0-3,0)
Предоперационная подготовка: хирургические вмешательства в области бедра	2,0 (2,0-3,0)
Все остальные хирургические вмешательства	2,5 (1,5-2,5)
Лечение тромбоза глубоких вен, легочной тромбоэмболии и профилактика повторного венозного тромбоза.	3,0 (2,0-4,0)
Профилактика артериальной тромбоэмболии, включая пациентов с искусственными клапанами	3,5 (3,0-4,5)
высокий средний низкий	2,5 — 3,0 2,0 — 3,0 1,6 — 2,0

Является третьим по значимости базисным скрининговым тестом. Тест характеризует конечный этап процесса свертывания – превращение фибриногена в фибрин под действием тромбина, на него влияет концентрация фибриногена в плазме и наличие продуктов деградации фибрина (ПДФ) .

Количественное определение по методу Клаусса является базисным тестом исследования гемостаза. Образование фибрина и его стабилизация представляют собой финальный этап формирования тромба, при котором растворимый фибриноген превращается в нерастворимый фибрин под действием тромбина и фактора XIII.
При атеросклерозе наблюдается устойчивое увеличение уровня фибриногена, трудно корригируемое лекарственными препаратами. В результате риск сердечно-сосудистых заболеваний повышается с возрастанием исходного содержания фибриногена в интервале 3,0-4,5 г/л. Обнаружено, что повышение уровня фибриногена в плазме крови больных сердечно-сосудистыми заболеваниями предшествует развитию инфаркта миокарда и инсульта. Корреляция между уровнем фибриногена и развитием этих осложнений особенно четко прослеживается у пациентов молодого и среднего возраста. Определение уровня фибриногена – наиболее чувствительный тест для выявления бессимптомных стадий заболевания периферических артериальных сосудов.

Специальные тесты для оценки плазменного звена гемостаза

Фактор VIII синтезируется в печени, селезенке, клетках эндотелия, лейкоцитах, почках и принимает участие в первой фазе (протромбиназообразование) плазменного гемостаза. Определение фактора VIII играет важнейшую роль в диагностике гемофилии А.
Развитие гемофилии А обусловлено врожденным недостатком фактора VIII. При этом в крови больных фактора VIII нет (гемофилия А») или он находится в функционально неполноценной форме, которая не может принимать участия в свертывании крови (гемофилия А+). Гемофилия А» встречается у 90-92 % больных, а гемофилия А+ – у 8-10 % . У больных гемофилией резко снижено содержание в плазме крови F VIII:C, а концентрация в ней VIII-vWF находится в пределах нормы. Поэтому время длительности кровотечения при гемофилии А находится в нормативных пределах, а при болезни Виллебранда – удлинено.
Гемофилия А — наследственное заболевание, однако у 20-30 % больных гемофилией семейный анамнез со стороны родственников матери никакой информации не дает. Поэтому определение активности фактора VIII имеет большую диагностическую ценность. В зависимости от уровня активности фактора VIII разделяют следующие клинические формы гемофилии А: крайне тяжелая форма (активность фактора VIII от 0 до 1 %); тяжелая форма (активность фактора VIII от 1 до 2 %); средней тяжести (активность фактора VIII от 2 до 5 %); легкая форма, или субгемофилия (активность фактора VIII от 6 до 24 %).
Около трети носителей гемофилии А имеют уровень активности фактора VIII между 25 и 49 %. У больных легкой формой и носителей гемофилии А клинические проявления заболевания отмечаются только после травм и хирургических вмешательств. Минимальный гемостатический уровень активности фактора VIII в крови для выполнения операций – 25 %, при более низком содержании риск развития послеоперационных кровотечений чрезвычайно велик. Минимальный гемостатический уровень активности фактора VIII в крови для остановки кровотечения – 15-20 %, при более низком содержании остановка кровотечения без введения больному фактора VIII невозможна. При болезни Виллебранда минимальный гемостатический уровень активности фактора VIII для остановки кровотечения и для выполнения операции – 25 % .
При ДВС-синдроме, начиная со II стадии, отмечается отчетливое снижение активности фактора VIII вследствие коагулопатии потребления. Тяжелые заболевания печени могут привести к снижению содержания фактора VIII в крови. Содержание фактора VIII снижается при болезни Виллебранда, а также при наличии специфических антител к фактору VIII. Активность фактора VIII значительно повышается после спленэктомии. В клинической практике очень важно дифференцировать гемофилию от болезни Виллебранда.

Показатели коагулограммы при гемофилии и болезни Виллебранда

Показатель	Гемофилия	Болезнь Виллебранда
Время свертывания крови	Удлинено	Норма
Длительность кровотечения	Норма	Удлинено
Агрегация тромбоцитов с ристоцетином	Норма	Снижена
Протромбиновое время	Норма	Норма
АЧТВ	Удлинено	Норма
Тромбиновое время	Норма	Норма
Фибриноген	Норма	Норма

Фактор VII (проконвертин, или конвертин) относится к α2-глобулинам. Врожденный недостаток фактора VII обуславливает развитие геморрагического диатеза (болезнь Александера).
Приобретенные формы гипопроконвертинемии встречаются у младенцев в первые дни жизни, у больных с поражением печени, а также в результате действия непрямых антикоагулянтов. Отмечается снижение активности проконвертина в плазме крови у больных вирусным гепатитом, циррозом печени, при остром алкогольном гепатите, хроническом персистирующем гепатите. У больных с циррозом печени просматривается отчетливая связь между снижением уровня проконвертина и тяжестью процесса. Из-за короткого периода полураспада снижение активности проконвертина является лучшим маркером развития печеночной недостаточности.
Минимальный гемостатический уровень активности фактора VII в крови для выполнения операций составляет 10-20 %, при более низком содержании риск развития послеоперационных кровотечений чрезвычайно велик. Минимальный гемостатический уровень активности фактора VII в крови для остановки кровотечения – 5-10 %, при более низком содержании остановка кровотечения без введения больному фактора VII невозможна .
При ДВС-синдроме, начиная со II стадии, отчетливо снижается активность фактора VII вследствие коагулопатии потребления.

(фибринстабилизирующий фактор, фибриназа, фактор Лаки-Лоранда) относится к β2-гликопротеидам. Врожденный дефицит фактора XIII наследуется по аутосомно-рецессивному типу преимущественно мужчинами. Первым клиническим признаком дефицита фибриназы у 80 % больных бывает длительное (в течение дней, иногда недель) кровотечение из пупочной раны. Кровоточивость проявляется по петехиальному типу. Случаются кровоизлияния в мозг. Отмечается медленное заживление ран, часто образуются послеоперационные грыжи, плохо срастаются переломы. Все параметры в коагулограмме, кроме снижения уровня фактора XIII в плазме, остаются в пределах нормы. Приобретенный дефицит фактора XIII выявляется у больных С-авитаминозом, лучевой болезнью, лейкозами, циррозами, гепатитами, раком с метастазами в печень, лимфомой, с ДВС-синдромами, у перенесших адреналэктомию; после приема антикоагулянтов непрямого действия ее активность снижается. Снижение фактора XIII в крови при этих заболеваниях обусловлено нарушением его синтеза либо расходованием в процессе ДВС-синдрома.
Активностьфактора XIII рекомендуется исследовать при длительно и плохо заживающих ранах и переломах, поскольку в ряде случаев такие явления могут быть связаны с дефицитом этого фактора, так как фактор XIII стимулирует развитие фибробластов.
Минимальный гемостатический уровень активности фактора XIII в крови для остановки кровотечения – 1-2 %, при более низком содержании остановка кровотечения без введения больному фактора XIII невозможна .
У больных с тромбоэмболическими осложнениями, атеросклерозом, после оперативных вмешательств, у рожениц, после введения адреналина, глюкокортикоидов, питуитрина активность фибриназы часто повышена.

Резистентность фактора V к активированному протеину С . К ряду новых, еще недавно неизвестных, но широко распространенных тромбофилий относится состояние, вызванное резистентностью фактора V к активированному протеину С. Наследственная резистентность к активированному протеину С (РАПС) является наиболее частой причиной первичных тромбофилий. Среди пациентов с тромбозами эта патология встречается у 30-60%, а среди клинически здоровой популяции – в 10-15%. РАПС в 90% случаев обусловлена точечной мутацией гена фактора V. Она вызывает замену в молекуле фактора V аргинина на глицин в 506 позиции – основном участке действия активированного протеина С (АПС). Результатом этой аномалии является низкая чувствительность, то есть резистентность фактора Va (фактор V Лейден) к инактивации его АПС. При сохраненной прокоагулянтной активности фактора Va это приводит к генерации тромбина и тромбофилическому состоянию. По клиническим проявлениям РАПС протекает более доброкачественно, чем врожденный дефицит , протеина С и протеина S . К наиболее важным клиническим факторам риска развития тромбоза при РАПС относятся хирургическое вмешательство, беременность и использование оральных контрацептивов. Установлено, что около 30% послеоперационных тромбозов обусловлено РАПС. При беременности РАПС может проявиться тромбозом плацентарных сосудов и внутриутробной гибелью плода. У женщин, имеющих мутацию Лейдена и использующих оральную контрацепцию, риск развития тромбоза повышен в 30 раз. Результаты эпидемиологических исследований свидетельствуют о нередком сочетании РАПС с наследственным или приобретенным дефицитом протеина S или протеина С. Понятно, что при таких комбинированных дефектах риск развития тромбозов возрастает. Принципиально важно, что высокая распространенность РАПС в общей популяции диктует необходимость лабораторного тестирования этой патологии не только у пациентов с тромбозами, но и у асимптоматичных лиц в условиях высокого риска тромбообразования. При резистентности фактора V к активированному протеину С величина АПС-индекса будет ниже значения нижней границы нормы. Для подтверждения результатов функциональных тестов разработано несколько методов на базе полимеразной цепной реакции для диагностики резистентности фактора Va к активированному протеину С.

Коагулограмма.

Наиболее часто применяемые тесты для исследования гемостаза:

1. Время свёртывания венозной крови по Ли-Уайту – это время образования сгустка в одном миллилитре нативной венозной крови больного в стеклянной пробирке при 37C в норме 5-8 минут. Это ориентировочный общекоагуляционный тест, т.е. характеризует систему свёртывания крови в целом при нормальных показателях этот тест даёт информацию о том, что ПТИ больше 30%, фибриноген больше 1 г/л.
2. Время рекальцификации плазмы – это время свёртывания плазмы больного (полученной из крови, стабилизированной раствором цитрата натрия) при добавлении к ней раствора хлористого кальция. В норме 120-150 сек. Это является ориентировочным общекоагуляционным тестом.
3. Активированное время рекальцификации – это время свёртывания плазмы больного (полученной из «цитратной» крови) при добавлении навески каолина (каолин – белая глина, это поверхностно-активное вещество, применяемый для контактной инактивации свёртывания с целью более точного выявления нарушений в фазах свёртывания крови) после рекальцификации добавлением хлористого кальция. В норме 60-80 сек. Является точным и чувствительным методом.
4. Определение содержания фибриногена по Р. Л. Рутбергу. Метод основан на рекальцификации одного миллилитра цитратной плазмы и взвешивании образовавшегося сгустка фибрина (после отжатия из него жидкой фазы). Вес такого сгустка в норме 9-18 мг., что по калибровочным кривым соответствует концентрации фибриногена 2-4 г/л.
5. Паракоагуляционные тесты (В – нафтоловый, этаноловый, протаминсульфатный) – выявляет наличие в крови больного РКМФ (растворимый комплекс мономеров фибрина – это комплекс мономеров и частичных полимеров (неполных), растворимых в воде, старое название флобриноген В ). Наличие РКМФ в крови говорит о возможности или присутствии тромбонов либо ДВС. К цитратной плазме больного добавляют соответствующий реактив (В – надолол, протаминсульфат или 50%-ы й этанол). При наличии РКМФ мономеры фибрина высвобождаются, действие свёртывающих компонентов плазмы полимеризует эти мономеры с образованием сгустка. В норме РКМФ в крови нет, поэтому в процессе теста сгусток не образуется.
6. Фибриноген В – это РКМФ. В норме отсутствует. При его наличии, выражаемом плюсами, имеется гиперкоагуляция, с возможным или явным тромбозом.
7. Протромбиновое время (синоним – протромбиновый индекс) – это время свёртывания цитратной плазмы после внесения в неё стандартного раствора тромбопластина и хлористого кальция. Характеризует активность VII, X, V, II факторов протромбинового комплекса, которые является витамин К - зависимым. Поэтому тест широко применяется для контроля терапии непрямыми антикоагулянтами (антивитаминами К). При применении высокоактивного стандартного тромбопластина результат выражают в секундах (в норме 12-15 с.), но в связи с несоответствием большинства отечественных тромбопластинов стандарту результат выражают относительно в процентах или единицах протромбинового времени плазмы. Норма 80-100% или 0,8-1,1. Выше 110% результат быть не может, иначе это ошибка лаборатории.
8. Активированное частично (парциально) тромбопластиновое время – АЧТВ и АПТВ – синоним каолин-кефалиновое время плазмы. Кефалин – взвесь фосфолипидов, необходимых для свёртывания крови. Так же как и каолин, кефалин применяется для сокращения свёртывания в тесте, следовательно, для стандартизации и повышения точности теста. В данном случае в цитратную плазму до рекальцификации вводят навеску каолина (каолиновое время 60-70 сек.) и кефалин (кефалиновое время (если вводят только кефалин) синоним парциальное тромбопластиновое время, норма 55-56 сек.). В норме АЧТВ (т.е. с добавлением каолина и кефалина) – 35-45 сек. Кефалин является заменителем тромбоцитарного фактора 3. Тест весьма чувствителен к плазменным дефектам (дефицит XII, XI, IX, VIII, а так же к избытку антикоагулянтов). При лёгкой гипокоагуляции АЧТВ – 50-60 сек., средняя – 80-90 сек., выраженная более 90 сек. При гиперкоагуляции АЧТВ – менее 30 сек.
9. Определение количества тромбоцитов в крови. В норме (180-320)*10^9/л. Считают в камере или в мазке.
10. Определение времени кровотечения (по методу Дьюка, Борхгревинна, Айви и др.). Это время кровотечения из раны на нож (прокол или небольшой разрез-царапина) при обычном венозном давлении или при накладывании на плечо манжетки, в которой создаётся давление 40 мм рт.ст. Норма до 5 минут (при накладывании манжетки до 8 минут). Характеризует суммарное состояние сосудисто-тромбоцитарного гемостаза.
11. Тромбоцитарное время свёртывания плазмы. Это время свёртывания нормальной плазмы при добавлении раствора тромбина в равных объёмах. Даёт представление о состоянии ___________ этапа свёртывания. В норме 14-16 сек. При гиперкоагуляции – укорачивается, при гипокоагуляции – удлиняется.
12. Аутокоагуляционный тест. 0,1 мл цитратной крови больного смешать с двумя мл 0,222% гипотонического раствора CaCl2 образуется гемолизат – кальциевая смесь, в которой начинается процесс активации протромбина и превращения его в тромбин. К плазме больного добавляют этот гемолизат в разные сроки (2-й, 4-й,6-й, 8-й, 10-й, 20-й, 30-й, 40-й, 50-й, 60-й минутах или чаще только на 8-й и 10-й минутах). Строят график, который показывает нарастание активности тромбопластина и тромбина, а так же скорость инактивации тромбина антитромбинами и продуктами фибринолиза.

Характеризует гипокоагуляцию в норме на 8-й и 10-й мин. 7-11 сек.

13 Антитромбин III – первичный антикоагулянт плазмы крови. Исследуемая плазма дефибринируеттся (прогреванием, змеиным ядом или другими способами), затем добавляют стандартное кол-во тромбина (можно добавлять активированный фактор Xа, который так же блокируется антитромбином III ,-это вариант метода). Смесь инкубируют при 37С, а затем тестируют на растворе фибриногена или адсорбированной плазме через каждые 3 мин. в течении 9 мин. Об уровне антитромбина III по ослаблению свертывающей активности тромбина (количественное определение по калибровочной кривой). В норме 90-100 %. Гепарин действует только в присутствии антитромбина III (при соединении с ним).

14 Толерантность плазмы к гепарину - это время свертывания цитратной плазмы при внесении в нее небольших количеств гепарина и последующей рекальцификации. В норме 5-7 мин. Это общекоагуляционный тест, но более чувствительно отражает наклонность к тромбообразованию, при этом тест менее 5 мин., что по-видимому связано со снижением антитромбина -III.

15 Ретракция кровяного сгустка - это часть жидкости, отжатой сгустком при сокращении от количества плазмы. В норме 65 – 85 %. Менее 65% - сгусток дряблый, более 65% - плотный. Тест весьма неточен, малоинформативен, зависит от качества стекла и других лаб. принадлежностей, а так же биохимических показателей крови.

16 Спонтанный фибринолиз - это кол-во эритроцитов, выпавших из сгустка в процессе ретракции и лизиса, т.е. «мера спонтанной разрушаемости сгустка» при инкубации 37С 2 часа, (можно 3 часа). Метод неточен, неверен, т.к. показано, что формирование осадка _____________ эритроцитов не связано с фибринолизом. В норме 10-20%

17 Эуглобулиновый метод определения фибринолитической активности (син-эуглобулиновый тест). Это время растворения сгустка эуглобулинов, осажденных из исследуемой плазмы уксусной кислотой и свертываемых хлористым кальцием (или тромбином). По способу Коваржика-Булука: в кислой среде при низкой температуре осаждается эуглобулиновая фракция(это плазминоген, его активаторы, факторы свертывания, фибриноген). В осадок выпадают ингибиторы фибринолиза в очень малом количестве. Эуглобулиновую фракцию растворяют, затем вызывают в ней свертывание (добавлением хлорида Са или тромбина), определяют время лизиса полученного сгустка при 37С. В норме 3-4 часа(2-4, в среднем 3 часа). При повышении фибринолитической активности лизис ускоряется, при дефиците плазминогена и его активаторов замедляется. Используется методика для определения активности фибринолитической системы.

18 Клинические пробы щипка, жгута, баночная проба Нестерова. Показывают состояние проницаемости сосудистой стенки под влиянием относительно дозированного воздействия (щипок кожи, наложение жгута на плечо, присасывающее действие «банки» при разряжении воздуха в ней). Дают грубую, но часто важную информацию о состоянии сосудисто-тромбоцитарного гемостаза. Результат оценивают по количеству петехий, появляющихся на исследуемом участке кожи после механического воздействия.